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蛋白质分析仪的原理
蛋白质分析仪
的检测原理基本上比浊一统天下,差别仅在于结构方式上。可以说,一般生化分析仪也能做(当然结果差不少)。比浊检测是很古老的检测方式,在众多比色分析法中,比浊法是不具备,光学特异性的,因此应用很少。但由于对特殊蛋白的测定要求反应特异性很高,需使用抗原抗体反应的特异性才能达到要求。而比浊法在酶标技术产生前是技术的基本检测手段,如单扩,双扩都是通过比浊来定性或半定量检测的。这了定量,专门为比浊生产的仪器就出现了,即如今特种蛋白分析仪的前身。
比浊法原理:利用光线散射原理,根据雷利散射公式,在一定条件下,透射光与微粒浓度成正比,散射光与微粒浓度成反比。(只适用于低浊度溶液)
特种蛋白分析仪从结构上主要分为透射比浊和散射比浊。
透射比浊,测定的是透射光和浊度的关系。结构简单,设计容易,但受入射光影响大,灵敏度低。
散射比浊,测定散射光和浊度的关系。灵敏度较高,但散射光因微粒大小和性质不同,可呈非均向散射,即不同的角度散射光的强度是不同的,因此利用散射比浊,不同的角度测定特性不同。大致说来,前散射因受血清中白蛋白,脂蛋白的影响小而常用,但不能排除乳糜的干扰。
影响比浊的因素:1.抗原抗体比例。抗原抗体比例对复合物的数量和颗粒大小关系极大,当抗体>抗原时成正相关,当抗体<抗原时成负相关。2.抗体纯度和效价。3.增聚剂。在反应中,为增强抗原抗体反应常使用增聚剂,如3-4%的聚乙二醇等,利用其破坏抗原抗体的水化层,促进其靠近反应,但如浓度不适合,高了会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。
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